პესტიციდები გადამწყვეტ როლს თამაშობენ გლობალური საკვების დეფიციტის მოგვარებასა და ვექტორებით გადამდები ადამიანის დაავადებების წინააღმდეგ ბრძოლაში. თუმცა, პესტიციდების მიმართ რეზისტენტობის მზარდი პრობლემა სასწრაფოდ მოითხოვს ახალი ნაერთების აღმოჩენას, რომლებიც მიზნად ისახავენ არასაკმარისად გამოყენებულ სამიზნეებს. მწერების გარდამავალი რეცეპტორული პოტენციალის (TRPV) არხებს - ნანჟონგს (Nan) და არააქტიურს (Iav) - შეუძლიათ ჰეტეროლოგიური არხების (Nan-Iav) წარმოქმნან და ლოკალიზდნენ მექანოსენსორულ ორგანოებში, რომლებიც აშუალებენ გეოტროპიზმს, სმენას და პროპრიოცეფციას მწერებში. ზოგიერთი პესტიციდი, როგორიცაა აფიდოპიროლიდონი (AP), მიზნად ისახავს Nan-Iav-ს უცნობი მექანიზმებით. AP ეფექტურია გამჭოლი მწერების (ჰემიპტერანების) წინააღმდეგ, ხელს უშლის კვებას ძაფების ფუნქციის დარღვევით. AP-ს შეუძლია დაუკავშირდეს მხოლოდ Nan-ს, მაგრამ მხოლოდ Nan-Iav-ს შეუძლია ურთიერთქმედება აგონისტებთან, მათ შორის ენდოგენურ ნიკოტინამიდთან (NAM), რითაც ავლენს არხის აქტივობას. მიუხედავად Nan-Iav-ის, როგორც ინსექტიციდის სამიზნეს, ცოტა რამ არის ცნობილი მისი არხის აწყობის, მარეგულირებელი შეკავშირების ადგილების და Ca2+-დამოკიდებული რეგულაციის შესახებ, რაც ხელს უშლის ინსექტიციდების შემდგომ განვითარებას. ამ კვლევაში, კრიოელექტრონული მიკროსკოპია გამოყენებული იქნა Hemiptera მწერებში Nan-Iav-ის სტრუქტურის დასადგენად კალმოდულინის ლიგანდისგან თავისუფალ მდგომარეობაში, ასევე ანკირინის განმეორების ციტოპლაზმური დომენის (ARD) საზღვარზე AP-თან და NAM-თან ერთად. გასაკვირია, რომ ჩვენ აღმოვაჩინეთ, რომ Nan ცილას თავად შეუძლია წარმოქმნას პენტამერი, რომელიც სტაბილიზდება AP-შუამავლობით ARD ურთიერთქმედებებით. ეს კვლევა ავლენს მოლეკულურ ურთიერთქმედებებს ინსექტიციდებსა და აგონისტებს და Nan-Iav-ს შორის, ხაზს უსვამს ARD-ის მნიშვნელობას არხის ფუნქციასა და აწყობაში და იკვლევს Ca2+ რეგულირების მექანიზმს.
გლობალური კლიმატის ცვლილების სულ უფრო მწვავე ფონზე, გლობალური სასურსათო უსაფრთხოების გაუარესება XXI საუკუნის ერთ-ერთი მთავარი გამოწვევაა, რომელსაც საზოგადოებისთვის კასკადური შედეგები მოჰყვება.1,2ჯანდაცვის მსოფლიო ორგანიზაციის „მსოფლიოში სურსათის უვნებლობისა და კვების მდგომარეობის“ 2023 წლის (SOFI) ანგარიშში შეფასებულია, რომ მსოფლიოში დაახლოებით 2.33 მილიარდი ადამიანი საშუალო და მძიმე ხარისხის სურსათის უვნებლობისგან იტანჯება, რაც დიდი ხნის პრობლემაა.3,4სამწუხაროდ, ყოველწლიურად, მავნებლებისა და პათოგენების გამო, მოსავლის დაახლოებით 20%-დან 30%-მდე ან მეტი იკარგება და, სავარაუდოდ, გლობალური დათბობა გაამწვავებს მავნებლებისადმი მდგრადობას და მოსავლის დაუცველობას.4,5,6,7,8პესტიციდების შემუშავება კრიტიკულად მნიშვნელოვანია არა მხოლოდ მავნებლებისგან მოსავლის დასაცავად და ვექტორებით გადამდები პათოგენების გავრცელების შესამცირებლად, არამედ ვექტორებით გადამდები ადამიანის დაავადებების წინააღმდეგ საბრძოლველად, როგორიცაა დენგეს ცხელება, მალარია და ჩაგასის დაავადება, რომლებიც სულ უფრო მდგრადია პესტიციდების მიმართ.5,9,10,11
ნეიროტოქსიკური ინსექტიციდების ძირითად სამიზნეებს შორის, ჰეტეროტეტრამერული TRPV არხი ნანჩუნგ (ნან)-ინაქტიური (Iav) წარმოადგენს ინსექტიციდების სამიზნეების კლასს, რომლებიც მხოლოდ ბოლო ათწლეულში აღმოაჩინეს და მათ შორისაა კომერციულად ხელმისაწვდომი ინსექტიციდები, როგორიცაა იმიდაკლოპრიდი და პირაკლოსტრობინი.12,13,14ნახევრადსინთეზური ინსექტიციდი აფიდოპიროლიფენი (AP) ახლახან შემუშავებული და კომერციალიზებული პროდუქტია, რომლის მთავარი კომპონენტია აქტიური ინსექტიციდი Inscalis®, რომელიც AP-ს სუბნანომოლარული აქტივობის დონეზე უკავშირდება.15AP-ს ახასიათებს დაბალი მწვავე ტოქსიკურობა დამამტვერიანებლების, სასარგებლო მწერების და სხვა არასამიზნე ორგანიზმების მიმართ და ეტიკეტზე მითითებული ინსტრუქციის შესაბამისად გამოყენებისას, მას შეუძლია შეამციროს სხვა ინსექტიციდების მიმართ რეზისტენტობა.16,17,18Nan და Iav ფართოდ არიან გავრცელებული მწერების სახეობებში, თანაექსპრესირდებიან მხოლოდ ანტენებისა და კიდურების ქორდული გაჭიმვის რეცეპტორულ ნეირონებში და კრიტიკულად მნიშვნელოვანია სმენის, გრავიტაციის აღქმისა და პროპრიოცეფციისთვის.13,16,19,20,21,22ანტიფსიქოტიკები, იმიდაკლოპრიდი და პირაკლოსტრობინი უნიკალური მექანიზმის მეშვეობით ასტიმულირებენ Nan-Iav კომპლექსს, რაც საბოლოოდ აფერხებს პროპრიოცეპტული სიგნალის ტრანსდუქციას.13,16,23ისეთ მჭრელ-მწოველ მწერებში (ჰემიპტერანებში), როგორიცაა ბუგრები და თეთრბუზები, პროპრიოცეპციის დაკარგვა არღვევს მათ კვების უნარს, რაც საბოლოოდ სიკვდილს იწვევს.13,24საინტერესოა, რომ AP-ს მაღალი აფინურობა ავლენს Nan-Iav კომპლექსის მიმართ და დაბალი აფინურობა მხოლოდ Nan-ის მიმართ. AP-ს Nan-Iav-თან შეკავშირება იწვევს ელექტრულ დენს, მაგრამ მხოლოდ Nan-თან შეკავშირება არ ასტიმულირებს არხის აქტივობას. თავად Iav საერთოდ არ უკავშირდება AP-ს.16ეს იმაზე მიუთითებს, რომ Nan-სა და Iav-ს შეიძლება დაუკავშირდნენ და შექმნან Nan-Iav არხის სხვადასხვა კომპლექსები (მაგ., სხვადასხვა სტოქიომეტრიული თანაფარდობით ან განსხვავებული განლაგებით იმავე სტოქიომეტრიული თანაფარდობის ფარგლებში) ან რომ AP-ს შეიძლება დაუკავშირდეს მრავალ ადგილს. გარდა ამისა, ბუნებრივი აგონისტი ნიკოტინამიდი (NAM) უკავშირდება დროზოფილა Nan-Iav-ს მიკრომოლური აფინურობით, რაც ავლენს მსგავს ეფექტებს, როგორც ბუგრების (AP) in vitro.16,25და აფერხებს ბუგრების გამრავლებასა და კვებას, რაც საბოლოოდ მათ სიკვდილს იწვევს25,26ეს მონაცემები ბევრ კითხვას ბადებს. მაგალითად, გაურკვეველი რჩება, თუ როგორ წარმოიქმნება Nan-Iav ჰეტეროდიმერი, რომელი შეკავშირების ადგილები გამოიყენება მცირე მოლეკულების მოდულირებისთვის და როგორ არეგულირებს ეს მცირე მოლეკულები არხის ფუნქციას პროპრიოცეფციის დათრგუნვით. გარდა ამისა, გაურკვეველი რჩება მიზეზები, თუ რატომ არის თავად Nan არააქტიური და აქვს დაბალი აფინურობა AP-ს მიმართ, მაშინ როდესაც Nan-Iav ჰეტეროდიმერი აქტიურია და AP-ს უფრო მაღალი აფინურობით უკავშირდება. და ბოლოს, ცოტა რამ არის ცნობილი Nan-Iav ფუნქციის Ca2+-დამოკიდებული რეგულირების შესახებ და იმის შესახებ, თუ როგორ არის ის ინტეგრირებული ნეირონულ სიგნალიზაციის პროცესებში.. 13,21
ამ კვლევაში, რომელიც აერთიანებს კრიოელექტრონულ მიკროსკოპიას, ელექტროფიზიოლოგიას და რადიოლიგანდის შეკავშირების ტექნიკას, ჩვენ განვმარტეთ Nan-Iav-ის აწყობა და მისი მცირე მოლეკულურ რეგულატორებთან შეკავშირების მექანიზმი. გარდა ამისა, ჩვენ აღმოვაჩინეთ Iav-თან კონსტიტუციურად შეკავშირებული კალმოდულინი (CaM) და AP-სტაბილიზირებული Nan პენტამერები. ეს შედეგები მნიშვნელოვან ინფორმაციას გვაწვდის არხებში კალციუმის იონების რეგულირების, არხების აწყობის და ლიგანდის შეკავშირების აფინურობის განმსაზღვრელი ფაქტორების შესახებ. უფრო მნიშვნელოვანია, რომ ჩვენ დავადასტურეთ, რომ ARD ცენტრალურ როლს ასრულებს ამ პროცესებში. ჩვენი კვლევა მოიცავს მწერების სრულ არხებს, რომლებიც დაკავშირებულია შესაბამის სასოფლო-სამეურნეო პესტიციდებთან.27, 28, 29ეს ხსნის პესტიციდების ინდუსტრიის განვითარების პერსპექტივებს, აუმჯობესებს პესტიციდების ეფექტურობასა და სპეციფიკურობას და შესაძლებელს ხდის TRPV-სთვის განკუთვნილი ნაერთების სხვა სახეობებზე გამოყენებას გლობალური სურსათის უვნებლობისა და ვექტორებით გადამდები დაავადებების გავრცელების პრობლემების გადასაჭრელად.
ასევე აღმოვაჩინეთ, რომ Nan-Iav რეგულირდება Ca2+-ით და რეგულაციის მექანიზმი განპირობებულია კონსტიტუციურად შეკავშირებული CaM-ით. მნიშვნელოვანია, რომ Nav-ის Ca2+-დამოკიდებული ეს რეგულირება CaM-ით მნიშვნელოვნად განსხვავდება სხვა იონური არხების (მაგ., ვოლტაჟდამოკიდებული Na+ არხების და TRPV5/6 არხების) რეგულაციის მექანიზმებისგან.52,53,54,55,56,57Nav1.2 არხში, CaM-ის C-ტერმინალური დომენი სპირალურად უკავშირდება C-ტერმინალურ დომენს (CTD) და Ca2+ იწვევს მისი N-ტერმინალური დომენის შეკავშირებას CTD-ის დისტალურ ნაწილთან.56TRPV5/6 არხში, CaM-ის C-ტერმინალური დომენი უკავშირდება CTH-ს, ხოლო Ca2+ იწვევს მისი N-ტერმინალური დომენის აღმავალი გაფართოებას ფორებში, რითაც ბლოკავს კათიონების გამტარიანობას.53,54ჩვენ ვთავაზობთ მოდელს Nan-Iav-CaM-ის Ca2+-რეგულირებადი ფუნქციისთვის (სურ. 4h). ამ მოდელში, CaM-ის N-ტერმინალური დომენი კონსტიტუციურად უკავშირდება Iav-ის C-ტერმინალურ დომენს (CTH). მოსვენების მდგომარეობაში (დაბალი [Ca2+] კონცენტრაცია), CaM-ის C-ტერმინალური დომენი ურთიერთქმედებს Nan-თან, ასტაბილიზირებს ARD კონფორმაციას და ამით ხელს უწყობს არხის გახსნას. აგონისტის/ინსექტიციდის არხთან შეკავშირება იწვევს ფორების გახსნას, რაც იწვევს Ca2+-ის შემოდინებას. შემდეგ Ca2+ უკავშირდება CaM-ს, რაც იწვევს C-ტერმინალური დომენის დისოციაციას Nan-ის ARD-დან. რადგან CaM-ის შეკავშირების ბლოკირება არსებითად აუქმებს Ca2+-ის დამთრგუნველ ეფექტს, ეს დისოციაცია მოდულირებს ARD-ის მობილობას, რითაც იწვევს Ca2+-დამოკიდებულ ინჰიბირებას ან დესენსიბილიზაციას. არხის დენების სწრაფი აღდგენა კალციუმის იონების ელუირების შემდეგ (სურ. 4g) მიუთითებს, რომ ეს მექანიზმი ხელს უწყობს Ca2+-ით განპირობებულ ნეირონულ სიგნალებზე სწრაფ რეაგირებას. გარდა ამისა, Iav-ის C-ტერმინალური რეგიონი, რომელიც ჯერ კიდევ ბოლომდე შესწავლილი არ არის, სხვა როლებსაც ასრულებს არხის დამიზნებასა და მიმდინარე რეგულაციაში.21
და ბოლოს, ჩვენი კვლევა წარმოადგენს სასოფლო-სამეურნეო მნიშვნელობის ინსექტიციდ-ინსექტიციდის TRP არხის კომპლექსის მაღალი გარჩევადობის სტრუქტურას - აღმოჩენა, რომელიც აქამდე ჩვენთვის უცნობი იყო. აღსანიშნავია, რომ ჩვენ დავახასიათეთ მწერის არხის სტრუქტურა და ფუნქცია ადამიანის უჯრედებში (HEK293S GnTi–) და არა მწერის უჯრედებში. მზარდი ინსექტიციდების მიმართ რეზისტენტობისა და სურსათის უვნებლობასა და პათოგენებზე მიმდინარე ზეწოლის გათვალისწინებით, ჩვენი ნაშრომი გვაწვდის მნიშვნელოვან ინფორმაციას, რომელიც ხელს შეუწყობს ახალი ინსექტიციდების შემუშავებას ადამიანის ჯანმრთელობისა და გლობალური სურსათის უვნებლობის სასარგებლოდ. კვლევებმა აჩვენა, რომ ინსექტიციდები, როგორიცაა AP, ეფექტურია ზოგიერთი მავნებლის წინააღმდეგ, როდესაც გამოიყენება ეტიკეტზე მითითებული ინსტრუქციის შესაბამისად და აქვთ დაბალი მწვავე ტოქსიკურობა სასარგებლო დამამტვერიანებლებისთვის, რაც აჩვენებს მათ გარემოსდაცვით უსაფრთხოებას.13,16გარდა ამისა, ზოგიერთი ანტიფსიქოტიკის წარმოებულის კოღოებზე ტესტირებამ აჩვენა, რომ ისინი საბოლოოდ კარგავენ ფრენის უნარს. იმის გაგება, თუ როგორ უკავშირდება ეს მოდულირებადი ნაერთები Nan-Iav-ს, ხელს შეუწყობს არსებული ნაერთების მოდიფიკაციას ან ახალი ნაერთების შემუშავებას უფრო ეფექტური და ეფექტური გამოყენებისთვის.ზუსტიმავნებლების კონტროლი. ჩვენი კვლევა აჩვენებს, რომ Nan-Iav ARD ინტერფეისი კრიტიკულია არა მხოლოდ ენდოგენური ნაერთების, პესტიციდების და Ca2+-CaM აქტივობის რეგულირებისთვის, არამედ არხის აწყობისთვისაც. ჩვენ ვვარაუდობთ, რომ ჰეტეროდიმერის აწყობის დარღვევა მცირე მოლეკულებით შეიძლება იყოს უნიკალური და პერსპექტიული მიდგომა იონური არხის ინჰიბიტორების შესამუშავებლად.
რვა ორთოლოგური გენიდან შეირჩა ყავისფერი ხოჭოს (Halyomorpha halys) Nanchung-ისა და Inactive-ის სრული სიგრძის გენები, რომლებიც დეტერგენტებში შესანიშნავ სტაბილურობას ავლენდნენ. სინთეზირებული გენები კოდონ-ოპტიმიზირებული იქნა ადამიანის ექსპრესიისთვის და კლონირებული იქნა pBacMam pCMV-DEST ვექტორში (Life Technologies) XhoI და EcoRI შემზღუდავი ადგილების გამოყენებით. ამან უზრუნველყო, რომ კლონები ჩარჩოში იყვნენ C-ტერმინალურ GFP-FLAG-10xHis და mCherry-FLAG-10xHis ტეგებთან, რომლებიც HRC-3C პროტეაზას (PPX) მიერ იხლიჩება, რაც დამოუკიდებელი...გამოხატულებაNanchung-ისა და Inactive-ის pBacMam ვექტორში კლონირებისთვის გამოყენებული პრაიმერები იყო შემდეგი:
ცალკეული ნაწილაკების მიკროსკოპული გამოსახულებები მიღებული იქნა Titan Krios G2 გამტარი ელექტრონული მიკროსკოპით (FEI), რომელიც აღჭურვილი იყო K3 კამერით და Gatan BioQuantum ენერგეტიკული ფილტრით. მიკროსკოპი მუშაობდა 300 კევ-ზე, 20 eV ენერგიის პარამეტრით, 1.08 Å/პიქსელის ნიმუშის პიქსელის ზომით (ნომინალური გადიდება 81,000x) და დეფოკუსირების გრადიენტით -0.8-დან -2.2 μm-მდე. ვიდეოჩანაწერი შესრულდა წამში 40 კადრი სიჩქარით Latitude S მიკროსკოპის (Gatan) გამოყენებით, 25 e–px−1 s−1 ნომინალური დოზის სიჩქარით, 2.4 s ექსპოზიციის დროით და დაახლოებით 60 e–Å−2 საერთო დოზით.
სხივით გამოწვეული მოძრაობის კორექცია და დოზის შეწონვა ჩატარდა ფირზე MotionCor2-ის გამოყენებით RELION 4.061-ში. კონტრასტული გადაცემის ფუნქციის (CTF) პარამეტრის შეფასება ჩატარდა cryoSPARC-ში პაჩზე დაფუძნებული CTF შეფასების მეთოდის გამოყენებით62. შემდგომი ანალიზიდან გამოირიცხა ფოტომიკროგრაფია CTF მორგების გარჩევადობით ≥4 Å. როგორც წესი, cryoSPARC-ში წერტილის შერჩევისთვის გამოყენებული იყო 500–1000 ფოტომიკროგრაფის ქვესიმრავლე, რასაც მოჰყვა 2D კლასიფიკაციის რამდენიმე რაუნდი ფილტრაციის შემდეგ, რათა მიღებულ იქნას მკაფიო საცნობარო სურათი შაბლონზე დაფუძნებული ნაწილაკების შერჩევისთვის. შემდეგ ნაწილაკები ამოღებული იქნა 64-პიქსელიანი შემოსაზღვრული ყუთების და 4-ჯერადი დაჯგუფების გამოყენებით. არასასურველი ნაწილაკების კატეგორიების მოსაშორებლად ჩატარდა 2D კლასიფიკაციის რამდენიმე რაუნდი. საწყისი 3D მოდელი რეკონსტრუირებული იქნა ab initio რეკონსტრუქციის გამოყენებით და დახვეწილი იქნა არაერთგვაროვანი დახვეწის გამოყენებით cryoSPARC-ში. 3D კლასიფიკაცია ჩატარდა cryoSPARC-ში ან RELION-ში ARD ჰეტეროგენულობის საფუძველზე. მემბრანული დომენების მნიშვნელოვანი ჰეტეროგენულობა არ დაფიქსირებულა. ნაწილაკები დაიხვეწა C1 და C2 მეთოდების გამოყენებით; უფრო მაღალი C2 გარჩევადობის მქონე ნაწილაკები C2-თან მიმართებაში სიმეტრიულად ჩაითვალა და ბაიესის მეთოდით დახვეწისთვის RELION-ში იმპორტირდა. შემდეგ ნაწილაკები უკან გადაიტანეს cryoSPARC-ში საბოლოო არაერთგვაროვანი და ლოკალური დახვეწისთვის. საბოლოო გარჩევადობა და ნაწილაკების რაოდენობა ნაჩვენებია ცხრილში 1.
Nan+AP პენტამერების დამუშავებისას, ჩვენ შევისწავლეთ მემბრანული დომენების (განსაკუთრებით ფორების რეგიონის) გარჩევადობის გასაუმჯობესებლად სხვადასხვა მეთოდი, როგორიცაა სიგნალის გამოკლება და TMD ნიღაბი. თუმცა, ეს მცდელობები წარუმატებელი აღმოჩნდა ფორების რეგიონში პოტენციურად უკიდურესი არეულობისა და TMD-ის საერთო ჰეტეროგენულობის გამო. საბოლოო გარჩევადობა გამოითვალა კრიოSPARC-ში არაერთგვაროვანი დამუშავების მეთოდით ავტომატურად გენერირებული ნიღბის გამოყენებით, რომელიც ძირითადად ARD რეგიონს გულისხმობდა. ამან მიღწეული იქნა მნიშვნელოვნად მაღალი გარჩევადობა, ვიდრე მემბრანული დომენების (განსაკუთრებით VSLD რეგიონის) გარჩევადობა.
Nanchung-ისა და Inactive-ის აპო ფორმების საწყისი de novo მოდელები თავდაპირველად Coot63-ის გამოყენებით შეიქმნა, ხოლო Nan-ისა და Iav-ის ბაგების მოდელები დაბალი სანდოობის რეგიონების იდენტიფიცირებისთვის AlphaFold264-ის გამოყენებით. კალმოდულინის მოდელირება დაფუძნებული იყო Ca2+-შემაკავშირებელი და Ca2+-თავისუფალი მოდელების ხისტი სხეულის შესაბამისობაზე PDB-ის დანამატებში 4JPZ56 და 1CFD65, შესაბამისად. მოდელები დაიხვეწა სფერული დახვეწის გამოყენებით, სწორი სტერეოქიმიისა და კარგი გეომეტრიის უზრუნველსაყოფად. შემდეგ ფოსფატიდილქოლინი, ფოსფატიდილეთანოლამინი და ფოსფატიდილსერინი მოდელირებული იქნა კარგად განსაზღვრული ლიპიდური სიმკვრივეების სახით, ხოლო NAM და AP ლიგანდები მოთავსებული იქნა შესაბამის სიმკვრივეებში მჭიდრო შეერთებებში. შეზღუდვის ფაილები გენერირებული იქნა იზოფორმების SMILES სტრიქონიდან eLBOW-ის გამოყენებით PHENIX66-ში. და ბოლოს, მოდელები დაიხვეწა რეალურ სივრცეში PHENIX-ში, ლოკალური ბადისებრი ძიების და გლობალური მინიმიზაციის გამოყენებით მეორადი სტრუქტურის შეზღუდვებით. მოდელის დახვეწისა და სტრუქტურული ანალიზისთვის გამოყენებული იქნა MolProbity სერვერი, ხოლო ილუსტრაციები შესრულდა PyMOL-ისა და UCSF Chimera X-ის გამოყენებით. 67,68,69 აპერტურის ანალიზი ჩატარდა HOLE სერვერის გამოყენებით,70 ხოლო თანმიმდევრობის კონსერვაციის რუკების შედგენა - Consurf სერვერის გამოყენებით.71
სტატისტიკური ანალიზი ჩატარდა Igor Pro 6.2-ის, Excel Office 365-ისა და GraphPad Prism 7.0-ის გამოყენებით. ყველა რაოდენობრივი მონაცემი წარმოდგენილია საშუალო ± სტანდარტული შეცდომის (SEM) სახით. ორი ჯგუფის შესადარებლად გამოყენებული იქნა სტუდენტის t-ტესტი (ორმხრივი, დაუწყვილებელი). მრავალი ჯგუფის შესადარებლად გამოყენებული იქნა ვარიაციის ცალმხრივი ანალიზი (ANOVA), რასაც მოჰყვა დანეტის პოსტ-ჰოკ ტესტი. *P< 0.05, **P< 0.01 და ***P< 0.001 სტატისტიკურად მნიშვნელოვნად ითვლებოდა მონაცემთა განაწილების მიხედვით. Kd, Ki მნიშვნელობები და მათი ასიმეტრიული 95%-იანი სანდოობის ინტერვალები გამოითვალა GraphPad Prism 10-ის გამოყენებით.
კვლევის მეთოდოლოგიის შესახებ დამატებითი ინფორმაციისთვის, გთხოვთ, იხილოთ Nature Portfolio-ს ანგარიშის შეჯამება, რომელიც ამ სტატიაშია მოცემული ბმულით.
საწყისი მოდელი აგებული იქნა PDB 4JPZ და 1CFD მონაცემთა ბაზებიდან აღებული კალმოდულინის მოდელების გამოყენებით. კოორდინატები განთავსებულია ცილის მონაცემთა ბანკში (PDB) შემდეგი სარეგისტრაციო ნომრებით: 9NVN (Nan-Iav-CaM ლიგანდის გარეშე), 9NVO (Nan-Iav-CaM შეკავშირებული ნიკოტინამიდთან), 9NVP (Nan-Iav-CaM შეკავშირებული ნიკოტინამიდთან და EDTA-სთან), 9NVQ (Nan-Iav-CaM შეკავშირებული აფენიდოლპიროლინთან და კალციუმთან), 9NVR (Nan-Iav-CaM შეკავშირებული აფენიდოლპიროლინთან და EDTA-სთან) და 9NVS (Nan პენტამერი შეკავშირებული აფენიდოლპიროლინთან). შესაბამისი კრიოელექტრონული მიკროსკოპიის გამოსახულებები განთავსებულია ელექტრონული მიკროსკოპიის მონაცემთა ბაზაში (EMDB) შემდეგი სარეგისტრაციო ნომრებით: EMD-49844 (Nan-Iav-CaM ლიგანდის გარეშე), EMD-49845 (Nan-Iav-CaM კომპლექსი ნიკოტინამიდით), EMD-49846 (Nan-Iav-CaM კომპლექსი ნიკოტინამიდით და EDTA-თი), EMD-49847 (Nan-Iav-CaM კომპლექსი აფიდოპიროლინით და კალციუმით), EMD-49848 (Nan-Iav-CaM კომპლექსი აფიდოპიროლინით და EDTA-თი) და EMD-49849 (Nan პენტამერის კომპლექსი აფიდოპიროლინით). ფუნქციური ანალიზისთვის ნედლი მონაცემები წარმოდგენილია ამ ნაშრომში.
გამოქვეყნების დრო: 2026 წლის 28 იანვარი